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Chromatographie des glucides

Courrier à l’auteur
TP proposé par lycée La Martinière Duchère, Lyon (69)

 
  • Matériel nécessaire

    - papier à chromatographie : gel de silice sur aluminium (format 7 x 9 cm), il ne faut pas toucher la face blanche sur laquelle se feront les dépôts
    - bécher de 250 mL,
    - solvant à chromatographie des glucides,
    - film plastique transparent,
    - sèche-cheveux,
    - révélateur à préparer au dernier moment,
    - cuvette à révélation,
    - une grosse pince,
    - 5 micropipettes,
    - sève élaborée extraite d’un végétal (courgette),
    - solutions pures de glucose, de saccharose, de lactose, maltose à 20g/l.

     
  • Préparation des produits

    - préparation du solvant :
    • 60 % de méthyl-éthyl-cétone,
    • 20% d’acide acétique glacial,
    • 20 % de méthanol.

    - préparation du révélateur (mélanger les deux produits au dernier moment) :
    • 1 volume de permanganate de potassium à 2 %,
    • 1 volume de carbonate anhydre de sodium à 4%.

     
  • Extraction de la sève

    - presser doucement le pédoncule de la courgette très fraîche et simultanément, aspirer à l’aide d’une micropipette le liquide qui en sort : la sève élaborée. Extraire le liquide au dernier moment

     
  • Montage de la chromatographie

    - sur la plaque de gel de silice, tracer un trait au crayon à 1 cm du bord inférieur et placer 5 repères équidistants,
    - verser un peu moins d’un cm de solvant au fond du bécher et fermer la cuve à l’aide du film transparent.

     

     

  • Réalisation des dépôts et mise en route de la chromatographie

    - sur les repères tracés précédemment, déposer à la micropipette 3 fois une goutte de chaque solution de sucre et de sève extraite afin que chaque dépôt soit suffisamment concentré,
    - entre chaque dépôt, sècher au sèche-cheveux ou laisser sècher,
    - mettre la plaque dans la cuve : les d ;;p&ocircts doivent être au dessus du solvant,
    - fermer la cuve à l’aide du film et laisser migrer le solvant pendant 3/4 d’heure, 1 heure,

     
  • Révélation

    - sortir la plaque, la sécher au sèche-cheveux jusqu’à disparition complète de l’odeur d’acide acétique,
    - plonger la plaque dans le révélateur (qui vient d’être mélangé) en recouvrant le gel de silice, pendant 10 secondes environ,
    - sécher à nouveau.

     
  • Compréhension du résultat
     

     


    - les taches jaunes qui apparaissent correspondent à la réduction du permanganate par les fonctions alcool des sucres.
    - chaque sucre ayant migré plus ou moins haut sur le gel, il est identifiable par sa position dans le sens vertical.

     
  • Liens

    - Fiche technique de la chromatographie de l’acide lactique
    - Fiche technique de la chromatographie des acides du vin
    - Fiche technique de la chromatographie des acides aminés