Chromatographie
des sucres
TP proposé par lycée La martinière Duchère, Lyon
(69)
Courrier à l'auteur
- papier à chromatographie : gel de silice sur aluminium (format 7 x 9 cm), il ne faut pas toucher la face blanche sur laquelle se feront les dépôts
- bécher de 250 mL,
- solvant à chromatographie des glucides,
- film plastique transparent,
- sèche-cheveux,
- révélateur à préparer au dernier moment,
- cuvette à révélation,
- une grosse pince,
- 5 micropipettes,
- sève élaborée extraite d'un végétal (courgette),
- solutions pures de glucose, de saccharose, de lactose, maltose à 20g/l.
- préparation du solvant :
- 60 % de méthyl-éthyl-cétone,
- 20% d'acide acétique glacial,
- 20 % de méthanol.
- préparation du
révélateur (mélanger les deux produits au dernier
moment) :
- 1 volume de permanganate de potassium à 2 %,
- 1 volume de carbonate anhydre de sodium à 4%.
- presser doucement le pédoncule de la courgette trè fraîche et simultanément, aspirer à l'aide d'une micropipette le liquide qui en sort: la sève élaborée.{extraire le liquide au dernier moment}
- sur la plaque de gel de silice, tracer un trait au crayon à 1 cm du bord inférieur et placer 5 repères équidistants,
- verser un peu moins d'un cm de solvant au fond du bécher et fermer la cuve à l'aide du film transparent.
- sur les repères tracés précédemment, déposer à la micropipette 3 fois une goutte de chaque solution de sucre et de sève extraite afin que chaque dépôt soit suffisamment concentré,
- entre chaque dépôt, sècher au sèche-cheveux ou laisser sècher,
- mettre la plaque dans la cuve: les d;;pôts doivent être au dessus du solvant,
- fermer la cuve à l'aide du film et laisser migrer le solvant pendant 3/4 d'heure, 1 heure,
- sortir la plaque, la sécher au sèche-cheveux jusqu'à disparition complète de l'odeur d'acide acétique,
- plonger la plaque dans le révélateur(qui vient d'être mélangé) en recouvrant le gel de silice, pendant 10 secondes environ,
- sécher à nouveau.
- les taches jaunes qui apparaissent correspondent à la réduction du permanganate par les fonctions alcool des sucres.
- chaque sucre ayant migré plus ou moins haut sur le gel, il est identifiable par sa position dans le sens vertical.
- Identifier le(s) sucre(s) présent dans la sève élaborée (Seconde)
