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Techniques de laboratoire

Chromatographie de quelques sucres simples. <a href='http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/spip.php?article110' target='_blank'>Page liée</a>. [5652 views] Chromatographie de 4 vins en cours de fermentation malo-lactique. <A HREF='http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/ress/chromatographie/chr_vin.html' TARGET='_blank'>Page liée</A> [4972 views] Mutation portant sur la couleur d'une colonie de levures. [5046 views] Fécondation du colza (<em>Brassica napus</em>) : les tubes polliniques, véhiculant les gamètes mâles, pénètrent dans le tissu de transmission du style, jusqu'à la cavité ovarienne de la fleur d'angiosperme. Ici un tube pollinique révélé par épifluorescence (en blanc), longe la cavité ovarienne puis le funicule et féconde l'ovule anatrope (en rouge). [15687 views] Hybridation <em>in situ</em> : cette technique permet de déterminer sur une coupe histologique dans quelles cellules s'exprime un gène donné. Pour cela on produit une sonde d'ARN antisens marquée (séquence complémentaire d'une portion d'un ARNm donné), pouvant s'hybrider sur les ARNm issus de la transcription d'un gène de séquence connue. La sonde, hybridée aux ARNm, peut être révélée chimiquement et donne une couleur brune dans les cellules qui expriment le gène donné (en haut à gauche). Ici, il s'agit du gène CCLS6 qui s'exprime spécifiquement dans le tapis des étamines (CT d'anthère) du compagnon blanc (<em>Silene latifolia</em>). Les deux autres figures correspondent aux témoins : (en bas, à gauche) en utilisant une sonde sens sur les mêmes tissus et (à droite) une sonde anti-sens sur d'autres tissus (ici une coupe longitudinale de pistil). [6489 views] Test d'Ouchterlony.
<br />Le puits central (A) contient du sérum de lapin immunisé contre la BSA (Bovine serum albumin).
<br />Les autres puits contiennent respectivement du sérum de chèvre (B), de porc (C), de lapin (D), de boeuf (E), de cheval (F) et une solution de BSA (G).
<br />On constate la formation d'un arc de précipitation, qui correspond à la formation de complexes immuns, entre le puits central et les puits E et G.
<br /><a href='http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/ress/immuno/dif_imm.html' target='_blank'>Voir la technique</a> [14136 views] ADN d'oignon, coloration de Feulgen. [6759 views] Méduse d'ADN (extrait d'un bulbe d'oignon). <a href='http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/spip.php?article192' target='_blank'> Voir la technique d'extraction de l'ADN</a>. [12570 views] Chromatographie sur couche mince des pigments photosynthétiques du poivron vert. De haut en bas : carotènes, chlorophylle a, chlorophylle b, puis deux xanthophylles (lutéine pour le premier, ? pour l'autre). [4784 views] Chromatographie sur couche mince de germination de blé à la lumière (à gauche) et à l'obscurité (à droite : absence de la chlorophylle b). [4156 views] Chromatographie sur couche mince d'algue verte (à gauche) et d'algue brune (à droite : peu de chlorophylle b mais présence de fucoxanthine chez ces dernières). [3858 views] La microscopie confocale permet d'étudier la localisation de différentes protéines dans les cellules.  Des cellules PC12 (lignée tumorale dérivée de la crête neurale, chez le Rat) ont été transfectées pour exprimer la cavéoline 1 (protéine permettant de former des vésicules sur les membranes) et TrkA (récepteur du NGF=Nerve Growth Factor).  TrkA a la particularité d'être fusionné à la GFP (Green Fluorescent Protein), ce qui permet de le localiser par fluorescence verte.  La cavéoline 1 est détectée par un anticorps de lapin suivi d'un anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorochrome rouge. Elle apparaît donc en rouge.  Le récepteur à la transferrine est détecté par un anticorps de souris suivi d'un anticorps secondaire anti-souris couplé à un fluorochrome bleu. Il apparaît donc en bleu.  Légendes: (A) Le marquage du compartiment endosomal par le récepteur à la transferrine (Tnf-R) apparaît en bleu. (B) Marquage de la cavéoline 1 en rouge. (C) Superposition des marquages Tnf-R et cavéoline 1 ; les zones de colocalisation apparaissent en rose. (D) Localisation subcellulaire de TrkA-GFP révélée par la fluorescence verte de la GFP. (E) Superposition des marquages TrkA-EGFP et cavéoline 1 ; les zones de colocalisation apparaissent en jaune. (F) Superposition des marquages Tnf-R, TrkA-GFP et cavéoline 1 ; les zones de colocalisation apparaissent en blanc. Barre = 5 micron.    <BR>  L'observation par microscopie confocale montre que la cavéoline 1 et TrkA-GFP sont très largement co-localisés à la fois à la surface cellulaire (pointe de flèche) et à l'intérieur de la cellule (flèche). Le compartiment intracellulaire où se co-localisent la cavéoline 1 et TrkA-GFP est également marqué par un anticorps dirigé contre le récepteur à la transferrine.  Le marquage périphérique correspond à des sites particuliers de la membrane plasmique, des filopodes enrichis en actine sous-membranaire. Le marquage intracellulaire correspond aux endosomes précoces et de recyclage, enrichis en récepteur à la transferrine. Des mouvements vésiculaires déplacent TrkA-EGFP entre ces deux localisations cellulaires.  On peut noter la présence de 2 cellules (en haut à droite) sans marquage Cavéoline 1. Ces deux cellules n'ont pas été transfectées par le vecteur d'expression de la protéine (la transfection d'une population de cellules n'est jamais efficace à 100%). [5682 views] Chromatographie de pigments de feuille d'ortie. [3558 views] Liposomes de lécithine au microscope électronique à transmission (x 60 000). On observe des structures sphériques constituées d’un empilement de feuillets lipidiques analogues à ceux des membranes plasmiques. Les liposomes ont été obtenus après 15 minutes d’agitation magnétique modérée d’une solution de lécithine à 1% dans l’eau distillée. [1955 views] Photo de microscopie électronique à balayage montrant deux macrophages de souris et une levure (<em>Saccharomyces cerevisiae</em>). Pour obtenir les macrophages, on a injecté des billes de biogel en sous-cutané à une souris. Il y a formation d’un granulome = réaction immunologique peu intense, les macrophages se rassemblent temporairement autour du matériau inerte qu’ils ne phagocytent pas. Ensuite on dissèque la peau et on récupère le granulome à partir duquel on purifie les macrophages. On dépose les cellules sur une lamelle et on ajoute des levures, ce qui entraîne une activité de phagocytose (cf <a href='http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/photossql/photos.php?RollID=images&FrameID=macrophage_levures2'>photo suivante</a>). [4745 views] Photo de microscopie électronique à balayage montrant des macrophages de souris et des levures (<em>Saccharomyces cerevisiae</em>). On voit une levure opsonisée, et on devine la forme de trois levures déjà phagocytées par les macrophages. [3792 views]

SVT : Techniques de laboratoire

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